Estudio preliminar de la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de Plasmodium falciparum en un sistema heterólogo.

Abstract

La malaria es una enfermedad causada por hemoparásitos del género Plasmodium; existen cinco especies capaces de infectar al ser humano, entre ellas se encuentra Plasmodium falciparum, especie causante de la mayoría de muertes en el mundo durante el año 2018 según la organización mundial de la salud (OMS). El presente trabajo tiene como objetivo la expresión de un fragmento de la proteína hipotética PFL1395c de P. falciparum en un sistema heterólogo. Para lo cual se partió de la reactivación de las células E. coli XL1-Blue, las cuales contenían el vector de clonación y expresión pGEX4T-3, obtenidas en trabajos anteriores por el grupo de investigación, Biología Celular de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Colombia sede Bogotá. Luego se extrajo el ADN plasmídico de estas células y se purificó mediante el uso del kit Miniprep de Thermo Fisher, posteriormente se amplificó por PCR, se visualizó y analizó a través de geles de agarosa, el ADN plasmídico se envió a secuenciar y las secuencias obtenidas se analizaron mediante el uso de diferentes herramientas bioinformáticas. Seguidamente se indujo la expresión del fragmento de la proteína PFL1395c mediante el uso de Isopropil-β-D-1- Tiogalactopiranósido (IPTG), y finalmente se analizó la expresión de la proteína mediante electroforesis en geles discontinuos de poliacrilamida y se comprobó su presencia mediante una inmunodetección de tipo Dot blot usando el anticuerpo monoclonal 7 (AcM7). En conclusión el desarrollo de este trabajo permitió avanzar en el estudio de P. falciparum y en la estandarización de un método de expresión a baja escala de un fragmento de la proteína PFL1395c

Malaria is a disease caused by hemoparasites of the genus Plasmodium; there are five possibilities to infect humans, among them are Plasmodium falciparum, which causes the most deaths in the world during 2018 according to the World Health Organization (WHO). The present work aims at the expression of a fragment of the hypothetical protein PFL1395c of P. falciparum in a heterologous system. To this end, we started with the reactivation of the E. coli XL1-Blue cells, which contained the cloning vector and expression pGEX4T-3, obtained in previous works by the research group, Cell Biology of the Faculty of Medicine of the National University of Colombia Bogota headquarters. The plasmid DNA was then extracted from these cells and purified by the use of the Thermo Fisher Miniprep kit, subsequently amplified by PCR, visualized and analyzed through agarose gels, the plasmid DNA was sent to be sequenced and the sequences obtained they were analyzed by using different bioinformatics tools. Subsequently, the expression of the PFL1395c protein fragment was induced by the use of Isopropyl-βD-1-thiogalactopyranoside (IPTG), and finally the expression of the protein was analyzed by electrophoresis in discontinuous polyacrylamide gels and its presence was checked by means of an immunodetection of type Dot blot using monoclonal antibody 7 (AcM7). In conclusion, the development of this work allowed advancing in the study of P. falciparum and in the standardization of a method of low-scale expression of a fragment of the protein PFL1395c.